আণবিক জীববিজ্ঞানে, ভাল বাফার পছন্দ এবং বিভিন্ন ডিএনএ বিচ্ছিন্নকরণের পদক্ষেপের জন্য প্রস্তুতিটি প্রোটিন অভিব্যক্তিতে সরাতে বা শুরু করার জন্য অন্য ম্যাক্সি-প্রিপ কিট খোলার মধ্যে পার্থক্য হতে পারে। তাদের গুরুত্বপূর্ণ গুরুত্ব সত্ত্বেও, বাফার রেসিপিগুলি প্রায়শই এমন-রেসিপিগুলি পৃথক উপাদানগুলির জন্য ব্যাখ্যা বা যুক্তিযুক্ত ব্যতীত লিখিত হয়। যেমন একটি বাফার গ্লুকোজ-ট্রিস-ইডিটিএ বা জিটিই বাফার।
$config[code] not foundজিটিই কি জন্য ব্যবহৃত হয়?
জিটিই কোষের কোষের (খোলা ভেঙ্গে) এবং ভিতরে প্লাজমিড ডিএনএ সংগ্রহ করার পূর্বে ব্যাকটেরিয়া কোষের গর্তগুলি পুনরায় বসাতে ব্যবহৃত হয়। লিসোজাইম, যা কোষের ঝিল্লিকে নরম করে তোলে, প্রায়শই জিটিই বাফারের সাথে যোগ করা হয়। এই ধাপের সময় পুরো কোষগুলির একটি সমষ্টিগত স্থগিতাদেশ অর্জন করা যাতে পরবর্তীতে যোগ করা লাইসিস সমাধানগুলি সমস্ত কোষে পৌঁছতে পারে যা ভাল ডিএনএ ফলন পেতে চাচ্ছে। ডিটিএর জন্য স্থিতিশীল পরিবেশ সরবরাহ করার সময় জিটিই এটি করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে।
Osmolarity জন্য গ্লুকোজ
50 মিমি (মিলিমিওলার) গ্লুকোজ চিনিকে জিএসই বাফারে যুক্ত করা হয় যা অক্সোমোলিটি বজায় রাখতে যেখানে কোষের বাইরে ঘন ঘন ঘন ঘন কোষের ভিতরে থাকে। এটি অকালবৃদ্ধি সেল লাইসিস প্রতিরোধ করে, যা একত্রিতকরণ এবং অবনতির কারণে নিম্ন ডিএনএ ফলন করতে পারে। বাফারের অন্যান্য উপাদানও সমাধানটির অসাম্যত্বের ক্ষেত্রে অবদান রাখে, কিন্তু গ্লুকোজ, একটি অ-ইলেক্ট্রোলাইট হচ্ছে, এটি একটি ভাল পছন্দ কারণ এটি সমাধান এর বাফার বৈশিষ্ট্যগুলিতে হস্তক্ষেপ করে না।
পিএইচ স্থিতিশীলতার জন্য Tris
Tris হল ট্রিস (হাইড্রক্সাইমাইটিল) aminomethane এর সংক্ষিপ্ত নাম যা খুবই সাধারণ পিএইচ বাফার। জিটিই বাফার ক্ষেত্রে 25 মিমি ঘনত্বে অ্যাসিড লবণ (ট্রিস-এইচসিএল) বাফারে যোগ করা হয়। এটি প্লাসমিড ডিএনএর অ্যাসিড হাইড্রোলাইসিস (অবনতি) এবং অন্যান্য কোষ উপাদানগুলির অবাঞ্ছিত পার্শ্ব প্রতিক্রিয়াগুলিকে প্রতিরোধ করার জন্য একটি কাছাকাছি-শারীরিক 8.0 এর সমাধানটির পিএইচ-র বজায় রাখে।
EDTA ডিএনএ অবনতি প্রতিরোধ করে
EDTA, অথবা ethylenediaminetetraacetic অ্যাসিড, ক্যাপচার বা সমাধান আউট "chelates" ধাতু আয়ন, অবাঞ্ছিত পার্শ্ব প্রতিক্রিয়া অংশগ্রহণ থেকে তাদের প্রতিরোধ। জিটিই বাফারে, এডিটিএ 10 এমএম এ যোগ করা হয়। এর প্রাথমিক উদ্দেশ্য বাফারে বিনামূল্যে দস্তা, ম্যাগনেসিয়াম, এবং ক্যালসিয়াম পরিবেশন করা, যার ফলে সেই ধাতুগুলির জন্য প্রয়োজনীয় কিছু পথ দ্বারা ডিএনএ অবনতি প্রতিরোধ করা যায়।
কিছু গুরুত্বপূর্ণ টিপস
আপনার জিটিই বাফারকে ঠান্ডা রাখুন এবং এতে অনাকাঙ্ক্ষিত ব্যাকটেরিয়া বৃদ্ধির জন্য এটি ক্ষুদ্র পরিমাণে তৈরি করুন। চিনি এবং নিয়ন্ত্রিত পিএইচ একটি বড় বৃদ্ধি মাধ্যমের জন্য। সর্বদা বিশুদ্ধ পানি ব্যবহার করুন। ট্যাপ জল পাইপ থেকে ধাতু আয়ন একটি অতিরিক্ত হতে পারে, যা ইডিটি ক্যাপচার করার ক্ষমতা overwhelm করতে পারে। আপনার নমুনাতে হস্তক্ষেপের RNA উপস্থিতি সম্পর্কে সন্দেহ থাকলে, সমস্যার সমাধান করতে আপনার GTE বাফারে 100 মাইক্রোগ্রাম প্রতি মিলিলিটারে RNase A যোগ করুন।
